大鼠褪黑素（MT）ELISA試劑盒

l 本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本中大鼠褪黑素（MT）的含量。

l 有效期：6個月

l 保存條件：2-8℃

l 本試劑盒僅供科研使用，不得用于臨床診斷

實驗原理

試(shi)劑盒采用(yong)雙抗體(ti)一步夾心法酶(mei)聯(lian)免疫吸附試(shi)驗（ELISA）。往預先包(bao)被大(da)鼠褪黑素（MT）捕獲(huo)抗體(ti)的包(bao)被微孔(kong)中，依次(ci)加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體(ti)，經過(guo)溫育(yu)并(bing)*洗滌。用(yong)底物TMB顯色(se)，TMB在過(guo)氧化(hua)物酶(mei)的催(cui)化(hua)下(xia)(xia)轉化(hua)成藍色(se)，并(bing)在酸的作用(yong)下(xia)(xia)轉化(hua)成終(zhong)的黃色(se)。顏色(se)的深淺和樣品中的大(da)鼠褪黑素（MT）呈正相關。用(yong)酶(mei)標儀(yi)在450nm 波(bo)長下(xia)(xia)測定(ding)吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

樣(yang)本(ben)處(chu)理及要(yao)求

1. 血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
2. 血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
3.  組織勻漿：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據實驗需要適當調整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。

4.  細胞培養物上清或其它生物標本：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

注：標(biao)本溶血會影響(xiang)后檢(jian)測(ce)結果，因此溶血標(biao)本不宜進行此項檢(jian)測(ce)。

需要(yao)而未提供(gong)的試(shi)劑(ji)和器材

• 酶標儀(yi)（450nm）

• 高精度加樣器及槍頭(tou)：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

• 37℃恒溫箱

• 蒸餾水或去離子水

試劑盒組(zu)成(cheng)

大鼠褪黑素（MT）ELISA試劑盒備注：

1.  標(biao)準品濃度依次(ci)為：80、40、20、10、5、2.5 pg/mL

2.  經過(guo)大(da)量正常標(biao)本(ben)(ben)(ben)檢(jian)驗，標(biao)本(ben)(ben)(ben)的正常濃度值(zhi)均在試劑盒提供的檢(jian)測范圍內，實(shi)驗過(guo)程中直接取(qu)50μL樣本(ben)(ben)(ben)上樣即可。當有部(bu)分樣本(ben)(ben)(ben)值(zhi)超過(guo)zui大(da)標(biao)準(zhun)品濃度時，可用樣本(ben)(ben)(ben)稀(xi)釋液將標(biao)本(ben)(ben)(ben)進(jin)行適當稀(xi)釋后(hou)再進(jin)行實(shi)驗。

注(zhu)意事(shi)項

• 嚴格按照規定的時間(jian)和溫度進(jin)行溫育以保證準確結果(guo)。所有試劑都必須在使用前達到(dao)室溫20-25℃。使用后立即冷藏(zang)保存(cun)試劑。

• 洗(xi)板(ban)不正確可以導致不準確的結果。在加(jia)入底物(wu)前(qian)確保盡量吸(xi)干孔內液(ye)體。溫(wen)育(yu)過程中不要讓(rang)微孔干燥掉(diao)。

• 消(xiao)除板底殘留(liu)的液(ye)體和手指印，否則影響OD值(zhi)。

• 底物顯(xian)色液應呈無色或很淺的(de)(de)顏色，已經變藍(lan)的(de)(de)底物液不(bu)能(neng)使用。

• 避免試劑和(he)標本的交叉污(wu)染(ran)以免造成錯(cuo)誤結果。

• 在儲存和溫育時避(bi)免強光直接照射。

• 平衡至室溫后再打開密(mi)封袋以防水滴(di)凝聚在冷板(ban)條上(shang)。

• 任何(he)反應(ying)(ying)試(shi)劑(ji)(ji)不(bu)能接觸漂白溶劑(ji)(ji)或漂白溶劑(ji)(ji)所散發的強(qiang)烈氣體。任何(he)漂白成(cheng)分都會破壞試(shi)劑(ji)(ji)盒中反應(ying)(ying)試(shi)劑(ji)(ji)的生物活性(xing)。

• 不(bu)能使用過期產品。

• 如果(guo)可能(neng)傳(chuan)播疾病，所有的樣(yang)品(pin)(pin)都應(ying)管理(li)好，按照規定(ding)的程(cheng)序處理(li)樣(yang)品(pin)(pin)和(he)檢測裝置。

試劑準(zhun)備

試劑盒從(cong)冷(leng)藏(zang)環境中(zhong)取出(chu)應在室溫(wen)平衡后方(fang)可使用。

20×洗滌緩(huan)(huan)沖(chong)液(ye)的稀釋：蒸(zheng)餾(liu)水按1：20稀釋，即1份(fen)20×洗滌緩(huan)(huan)沖(chong)液(ye)加19份(fen)蒸(zheng)餾(liu)水。

操作步(bu)驟(zou)

1.  從(cong)室溫平衡(heng)20min后的鋁箔袋(dai)中取出所需板條，剩余板條用(yong)自封袋(dai)密封放回4℃。

2.  設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3.  樣本孔中加入(ru)待測(ce)樣本50μL；空白孔不加。

4.  除空白(bai)孔(kong)(kong)外(wai)，標準品孔(kong)(kong)和樣本(ben)孔(kong)(kong)中(zhong)每孔(kong)(kong)加入(ru)辣(la)根(gen)過氧化(hua)物(wu)酶(mei)（HRP）標記的檢測抗(kang)體100μL，用封板膜封住反應(ying)孔(kong)(kong)，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去(qu)液(ye)體，吸水紙上(shang)拍干(gan)(gan)，每孔加滿洗滌液(ye)（350μL），靜置1min，甩去(qu)洗滌液(ye)，吸水紙上(shang)拍干(gan)(gan)，如此(ci)重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔(kong)加入終(zhong)止(zhi)液50μL，15min內，在(zai)450nm波長(chang)處測定各孔(kong)的(de)OD值。

實驗結果計算

以所測標準(zhun)品(pin)的(de)OD值為(wei)(wei)橫坐標，標準(zhun)品(pin)的(de)濃度值為(wei)(wei)縱坐標，在坐標紙上或用相關軟件繪制標準(zhun)曲線，并得到直線回歸(gui)方程，將樣品(pin)的(de)OD值代(dai)入方程，計算出樣品(pin)的(de)濃度。

試劑盒(he)性能

• 檢(jian)測范圍：2.5 pg/mL – 80 pg/mL。

• 靈敏度：低檢測(ce)濃度小于0.1 pg/mL。

• 特異性：不與(yu)其它(ta)可溶性結(jie)構類似物交叉反應。

• 重復性：板內變異系(xi)數小(xiao)于10% ，板間變異系(xi)數小(xiao)于15% 。

說明

由(you)于現(xian)有條件及科(ke)學技術(shu)(shu)水(shui)平尚(shang)不能(neng)對所有供貨商提供的(de)所有原料(liao)進行全面的(de)鑒定與分析，本產(chan)品可能(neng)存在一定的(de)質量技術(shu)(shu)風險(xian)。

• 終的(de)實驗(yan)結(jie)果(guo)與試(shi)劑(ji)的(de)有效性(xing)、實驗(yan)者(zhe)的(de)相(xiang)關操(cao)作以及當時(shi)的(de)實驗(yan)環境密切相(xiang)關，請務必(bi)準備充足的(de)標本備份。

• 不同批次的同一產品可能會有少(shao)許差別，如：檢(jian)測限(xian)、靈敏(min)度以及顯色時(shi)間(jian)等，請依據試劑盒內(nei)說明書進行實驗操作，網站電子版(ban)說明書僅作參考(kao)。

• 只有全(quan)部(bu)使用本(ben)試(shi)(shi)劑(ji)盒配套試(shi)(shi)劑(ji)才能保證檢測效果，不(bu)能混用其他(ta)商的產品。只有嚴格(ge)遵守(shou)本(ben)試(shi)(shi)劑(ji)盒的實驗說明(ming)才會得到*的檢測結果。

• 本(ben)(ben)公司只對試劑(ji)盒(he)本(ben)(ben)身負(fu)責(ze)，不對因使用(yong)(yong)(yong)該試劑(ji)盒(he)所(suo)造成的樣本(ben)(ben)消耗負(fu)責(ze)，請(qing)使用(yong)(yong)(yong)者使用(yong)(yong)(yong)前充分(fen)考慮到樣本(ben)(ben)的可能使用(yong)(yong)(yong)量，預留充足(zu)的樣本(ben)(ben)。

• 使用化學(xue)裂(lie)解液制備的組織勻漿或(huo)細胞提取液可能(neng)會由(you)于某些化學(xue)物質的引(yin)入導致ELISA實(shi)驗結果(guo)偏差。

• 若樣本(ben)為(wei)細胞(bao)培(pei)養上清，因(yin)該(gai)類樣本(ben)干擾因(yin)素較多，如：細胞(bao)狀態(tai)、細胞(bao)數量、采樣時間(jian)等，所以(yi)可能存在(zai)檢測(ce)不出的情況(kuang)。

• 某些天然蛋(dan)白或(huo)重組蛋(dan)白，包括原核及真(zhen)核重組蛋(dan)白，可(ke)能因為與本產品所(suo)使用的(de)檢測抗體及捕獲抗體不匹配(pei)，而不被檢測出。